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超微量分光光度計檢測核酸的定量標準

更新時(shí)間:2021-08-05      點(diǎn)擊次數:2310
   核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率最高的功能??梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長(cháng)260nm。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類(lèi)型的核酸,事先要選擇對應的系數。測試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。。
  
  分光光度計的設計原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內變化都是正常的,即儀器有一定的準確度和精確度。影響吸光值A的幾個(gè)因素如下:
  
  《1》核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值,離子濃度等:在測試時(shí),離子濃度太高,也會(huì )導致讀數漂移,因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液。
  
  《2》樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素:由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了大程度減少顆粒對測試結果的影響,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值最好在0.1-1.5A。在此范圍內,顆粒的干擾相對較小,結果穩定。從而意味著(zhù)樣品的濃度不能過(guò)低,或者過(guò)高(超過(guò)光度計的測試范
  
  《3》操作因素,如混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現負值;混合液不能存在氣泡,空白液無(wú)懸浮物,否則讀數漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大;換算系數和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等多個(gè)操作事項。

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